Definición
Definición – La manzanilla está constituida por la inflorescencia desecada de Matricaria recutita L. (Matricaria chamomilla L., Chamomilla recutita (L. Rauschert) (Asteraceae). Debe contener no menos de 0,4 por ciento de aceite esencial y no menos de 0,3 por ciento de 7-glucósido de apigenina y debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Valoración
Contenido de 7-glucósido de apigenina
Sistema cromatográfico – Emplear un equipo para cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta ajustado a 335 nm y una columna de 12,5 cm × 4 mm con fase estacionaria constituida por octadecilsilano químicamente unido a partículas porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Programar la fase móvil para obtener una composición variable de Solución A y Solución B según se indica: en el momento de la inyección la proporción de Solución B corresponde al 26 %; mantener ese nivel durante 3 minutos; luego aumentar linealmente durante los siguientes 19 minutos hasta 85 % de Solución B; luego disminuir linealmente durante los siguientes 5 minutos a 26 % de Solución B y mantener esa composición durante los siguientes 3 minutos antes de la próxima inyección. El caudal debe ser aproximadamente 1 ml por minuto
Ácido fosfórico diluido – Transferir 5,0 ml de ácido fosfórico a un matraz aforado de 100 ml, agregar 50 ml de agua, diluir con agua a volumen y mezclar.
Solución A – Preparar una solución de fosfato monobásico de potasio 0,5 M. Ajustar con Ácido fosfórico diluido a un pH de 2,55 ± 0,05.
Solución B – Preparar una mezcla de acetonitrilo y metanol (65:35).
Preparación estándar – Disolver una cantidad exactamente pesada de 7-O-glucósido de apigenina y 7-metoxicumarina en metanol y diluir cuantitativamente y en etapas si fuera necesario, con metanol hasta obtener una solución con concentraciones conocidas de aproximadamente 25,0 µg de 7-O-glucósido de apigenina y 10,0 µg de 7-metoxicumarina por ml.
Preparación muestra – Pesar exactamente alrededor de 1,0 g de Manzanilla, transferir a un erlenmeyer equipado con un refrigerante y un agitador, agregar 80,0 ml de metanol, y calentar a reflujo la mezcla con agitación durante 1 hora. Enfriar el erlenmeyer a temperatura ambiente, filtrar la solución metanólica a través de un papel de filtro plegado y recoger el filtrado en un matraz aforado de 100 ml. Lavar el matraz con 3 ml de metanol, verter los lavados a través del papel de filtro y agregar el filtrado al matraz aforado. Diluir con metanol a volumen, mezclar y filtrar. Transferir 25,0 ml de la solución filtrada a un balón equipado con un refrigerante y un agitador, agregar 5,0 ml de solución de hidróxido de sodio, preparada mediante disolución de 0,4 g de hidróxido de sodio en 5,0 ml de agua y calentar a reflujo la mezcla durante 25 minutos. Enfriar el balón y ajustar la solución con ácido clorhídrico a un pH entre 5,0 y 6,2. Transferir cuantitativamente la solución a un matraz aforado de 50 ml, diluir con metanol a volumen, mezclar y filtrar, descartando los primeros 10 ml del filtrado.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) – Cromatografiar aproximadamente 15 µl de la Preparación estándar. Hacer los ajustes necesarios para obtener tiempos de retención relativos de aproximadamente 0,63 y 1,0 para 7-O-glucósido de apigenina y 7-metoxicumarina, respectivamente; registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la resolución R entre 7-O-glucósido de apigenina y 7-metoxicumarina no debe ser menor de 3,5; la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento – Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 15 µl) de la Preparación estándar y la Preparación muestra. Dejar eluir la Preparación muestra por lo menos seis veces el tiempo de retención de 7-O-glucósido de apigenina. Registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos observados en el cromatograma de la Preparación muestra. Los tiempos de retención relativos deben ser aproximadamente 0,30; 0,47; 0,66; 0,89 y 1,0 para 7-O-glucósido de apigenina, 7-metoxicumarina, apigenina, trans-espiroéter y cis-espiroéter, respectivamente. Calcular el porcentaje de 7-glucósido de apigenina en la porción de Manzanilla en ensayo, por la fórmula siguiente:
12(C/P)( /
en la cual C es la concentración en mg por ml de 7-O-glucósido de apigenina en la Preparación estándar; P es el peso en g de Manzanilla en ensayo para la Preparación muestra, y
) y son las respuestas de los picos de 7-O-glucósido de apigenina obtenidos a partir de la Preparación muestra y la Preparación estándar, respectivamente.