PRACTICA N°12:METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA
BASE BIOQUÍMICA.-
La bilirrubina es un pigmento amarillo, que se produce en el ser humano a partir del Núcleo HEM (que es una Protoporfirina Tipo IX ó Tetrapirrol macrocíclico, molécula que tiene insertado un átomo de Hierro )
.Sobre este núcleo HEM actúa la enzima Oxigenasa
Heme de los microsomas. Esta Oxigenasa rompe el enlace alfa meteno del anillo tetrapirrólico y se abre la molécula, convirtiéndose en el pigmento verde Biliverdina, el cual es subsecuentemente hidrogenado y forma Bilirrubina .Esta reducción la realiza la enzima citosólica biliverdina reductasa que es una enzima NADPH dependiente. Por cada mol de HEME catabolizado por esta ruta se produce un mol de bilirrubina, de CO2 y de ión férrico. La producción diaria de bilirrubina a partir de todas sus fuentes en el hombre es de 250 a 350 mg.
Aproximadamente el 85% de la bilirrubina total producida se deriva de la molécula del HEM de la Hb liberada a partir de los eritrocitos senescentes que son destruídos en el sistema retículo endotelial del hígado, bazo y médula ósea.
El 15% remanente se produce a partir de la destrucción de las células precursoras de los eritrocitos en la médula ósea ( llamada “eritropoyesis inefectiva”)
y también proviene del catabolismo de otras proteínas que contienen núcleo Hem como la mioglobina, citocromos, peroxidasas y que están distribuídas a través de todo el organismo
Después de su producción en los tejidos periféricos, la bilirrubina es transportada al hígado asociada a la albúmina .La Bilirrubina es rápidamente captada por los hepatocitos , se transporta y se conjuga al ácido glucurónico ( UDP – glucuronilo transferasa) para producir mono y diglucuronato de bilirrubina los cuales se excretan en la bilis.
Y después de ser excretados hacia el intestino delgado . En el tracto intestinal los glucorónidos de bilirrubina se hidrolizan a la forma no conjugada por el pH al alcalino del intestino delgado, y por la acción catalítica de la betaglucuronidasa del hígado, células epiteliales intestinales y las bacterias.
La bilirrubina no conjugada es posteriormente reducida por la flora bacteriana anaeróbica intestinal para formar un grupo de tres tetrapirroles incoloros colectivamente llamados Urobilinógenos que luego se reducen y forman tres productos: estercobilinógeno, mesobilinógeno y urobilinógeno. Hasta el 20% de los urobilinógenos producidos diariamente son reabsorvidos desde el intestino hacia la circulación pára ir al hígado (Circulación entero. Hepática). La mayor parte del urobilinógeno reabsorvido es capatado por el hígado y es re-excretado en la bilis y solamente un 2 a 5 % entra a la circulación general y aparece en la orina. En la parte mas baja del tracto intestinal, los tres urobilinógenos se oxidan espontáneamente y producen los pigmentos estercobilina, mesobilina y urobilina, y así estos pigmentos adquieren color marrón y que son los pigmentos que le dan color a las heces. Existen enfermedades congénitas y enefermedades adquiridas que afectan uno ó más de los pasos involucrados en la producción, capitación, depósito, metabolismo y excreción de la bilirrubina y la hiprbilirrubinemia es frecuentemente el resultado de estos transtornos. Esta bilirrubinemia puede ser a predominio No conjugado (Indirecta) ó Conjugado (Directa) dependiendo del tipo de desorden.
La hiperbilirrubinemia causa Ictericia.
Cuando la cifra de bilirrubina en la sangre excede del mg %, existe hiperbilirrubinemia .La hiperbilirrubinemia puede deberse a la producción de mas bilirrubina de la que el hígado normal puede excretar o a la insuficiencia de un hígado dañado para excretar la bilirrubina producida en cantidades normales. Ante la ausencia de daño hepático, la obstrucción de los conductos excretorios del hígado, previniendo la excreción de la bilirrubina, también causará hiperbilirrubinemia. En todos estos transtornos, la bilirrubinase acumula en la sangre y cuando alcanza una cierta concentración (aproximadamente de 2 a 2. 5 mg%)
se difunde dentro de los tejidos los cuales adquieren color amarillo, este transtorno se denomina ictericia. La concentración de bilirrubina en el suero es de gran valor, por eso en la presente practica la emplearemos.
Dentro de las causas de Ictericia Hemolítica tenemos:
Anemias hemolíticas, ictericia fisiológica neonatal (Inmedurez hepática para captación, conjugación y secreción de la bilirrubina), Sindrme de Crigler-Najar ( Alteración de la conjugación de bilirrubina),Enfermedad de Gilbert, Hiperbilirrubinemia tóxica(Agentes farmacológicos).
EXPERIMENTO A: DOSAJE DE BILIRRUBINA SERICA
FUNDAMENTO:
El suero sanguíneo es tratado con el reactivo diazoico (Ácido Sulfanílico + Nitrito de sodio) y se produce un complejo coloreado de color rojo violáceo debido a la presencia de bilirrubina conjugada al ac. Glucurónico (Directa) color que desarrolla directamente. La Bilirubina no conjugada (Indirecta)
requiere además la presencia de caféína ó alcohol metílico para que se desarrolle el color.