Clasificación
BG-: Bacteroides fragilis; Prevotella, Fusobacterium (produce ácido butírico), Porphyromonas (colonias pigmentadas negro y no toleran bilis). CG-: Veillonella. CG+: Peptostreptococcus, Micromonas. BG+: Clostridium (formador de esporas).
Factores de Virulencia Anaerobios:
- Toxinas: producidas por los clostridios.
- Lipopolisacáridos de superficie (varias especies de Fusobacterium, Veillonella y Bacteroides), tienen una actividad “endotoxina”.
- Polisacárido capsular (Bacteroides grupo fragilis): se comporta en forma similar a las cápsulas de otras bacterias.
- Diversas enzimas: hialuronidasas, DNAsas, catalasa, etc.
Signos Orientativos Infección Anaerobios
Pueden producir cualquier tipo de infección y en cualquier lugar del organismo, pero existen una serie de signos orientativos que indican que la infección está causada por anaerobios: aparición de un exudado mal oliente, infecciones cerca de las mucosas, necrosis tisular, aparición abscesos, desprenden gas los tejidos (gangrena gaseosa), visualizar MO con tinción gram, tratamiento previo con AB no funciona por la resistencia de los anaerobios a estos.
Recolección Muestras
Inaceptables: exudados, expectoración, secreciones oro o nasotraqueales, cepillado/lavado bronquial, contenido gástrico/intestinal, materias fecales, orinas obtenidas sonda. Adecuadas: bilis, sangre, médula ósea, LCR, otros fluidos estériles, orina punción suprapúbica, tejidos biopsia/autopsia, líquido pleural (toracocentesis), lavado bronquial con cepillo protegido, aspirado transtraqueal, etc.
Transporte Muestras
En la propia jeringa obturando la aguja con un tapón de goma, enviar antes de 30’, en desuso por riesgo de pinchazo. Se recurre a medios de transporte comerciales (se puede retrasar el tiempo de envío de las muestras). Son tubos que tienen indicador de anaerobiosis. También utilizadas las bolsas de plástico cerradas herméticamente, tienen generador de CO2 y indicador de anaerobiosis, la muestra en placas Petri las metemos y cerramos herméticamente. También frascos especiales para anaerobios en caso de líquidos estériles.
Procesamiento Muestras
1. Preparación de la muestra: debe ser procesada con máximas precauciones y lo antes posible (no + de 30’). Si es posible la preparación se debe hacer en una cámara de anaerobios para minimizar la oxigenación. 2. Examen directo: tinción gram. 3. Medios de cultivos apropiados: ASA/ Agar sangre para anaerobios: Contienen Vit. K y hemina, es un medio selectivo que permite el crecimiento de anaerobios estrictos y facultativos. ASLKV/Agar sangre lacada: Suplementado con Kanamicina y Vancomicina, es un medio selectivo puesto que solo crecen anaerobias estrictas y bacterias resistentes a los dos antibióticos. BBE/ Bacteroides bilis esculina: es un medio selectivo y diferencial que permite el crecimiento de los Bacteroides fragilis. EYA/ Agar yema de huevo: Es un medio específico, es decir, selectivo y diferencial que permite el crecimiento de Clostridium y sus especies. 4. Condiciones de Incubación: métodos + utilizados: cámara estufa para anaerobios (incorporado un sistema que proporciona ausencia total de O2), Bolsas de plástico cerradas herméticamente y Campana o jarra de anaerobios. Tanto la bolsa de plástico como la jarra se introducen en la estufa a 37ºC durante 48h, haciendo una inspección de las placas a diario. Después de 48h se abre el sistema de incubación manteniendo constante el flujo de CO2. Las muestras de líquidos o tejidos estériles se mantendrán durante una semana incubando antes de desecharlas como negativas. El examen de las colonias se debe hacer con una lupa. Una vez comprobado que el mo es un anaerobio estricto se procede a la identificación, existen dos niveles de identificación: Nivel 1: en laboratorio se hace el aislamiento y mantenimiento de los anaerobios (no identificación, envío a centro de referencia). Nivel 2: centro de referencia, se identifica el anaerobio a nivel de género y grupo, solo a veces a nivel de especie. 5. Pruebas identificación anaerobiosis: indol, catalasa, capacidad sacarolítica y proteolítica, detección dotación enzimática (sistemas comerciales como el API) y detección producto final metabolismo bacteriano con cromatografía gases.
Clasificación
1. Bacilos G+ No Esporulados: Actinomyces: A. meyeri es el único anaerobio estricto. Caracterizados por lesiones granulomatosas crónicas que se hacen supurativas y forman abscesos conectados mediante fístulas. Actimomyces israelii es el patógeno humano más importante. La actinomicosis es entonces una enfermedad endógena y se clasifica según los órganos que afecta en: – Actinomicosis cervicofacial. Ocurre en personas con mala higiene bucal. – Actinomicosis torácica, se produce por aspiración del agente desde el tracto respiratorio superior y la boca. – Actinomicosis abdominal ocurre en pacientes sometidos a cirugía digestiva o que han sufrido un traumatismo en el intestino. – Actinomicosis pélvica puede presentarse como una vaginitis. – Actinomicosis del SNC se produce generalmente por diseminación hematógena desde otros tejidos infectados, como los pulmones. Lactobacillus: facultativos, microaerófilos o anaerobios estrictos. Producen ácido láctico como principal producto de fermentación. En el hombre se encuentran formando parte de la flora normal de la boca, estómago, intestino y tracto genitourinario (constituyen la flora vaginal predominante en mujeres en edad reproductiva). Son los mo más frecuentes en la uretra. Rara vez producen infecciones del tracto urinario. Generalmente no son patógenos. Su efecto beneficioso ha sido demostrado cuando se administran en forma de probióticos. 2. Bacilos G-: Bacteroides: anaerobios obligados que están presentes en gran cantidad en el intestino grueso del ser humano y otros vertebrados. Llegan a constituir unos 1011 microorganismos o más por gramo de materia fecal. Entre los bacteroides intestinales B. fragilis es un componente menor, que en general se halla en concentraciones de 108 o 109 por gramo de materia fecal. Son cocobacilos pequeños gramnegativos, pleomórficos y no formadores de esporas. Tiene cápsula polisacárida. Se han descrito cepas de B. fragilis que producen una enterotoxina. Asociadas con enfermedades diarreicas en el ser humano.
Bacilos G+ Esporulados: Clostridium. Bacilos anaerobios formadores de esporas y en general Gram positivos. Casi todas las especies son anaerobias obligadas pero unas pocas especies son aerotolerantes. Producen toxinas solubles. Los clostridios patógenos pueden dividirse de acuerdo con el tipo de enfermedad que producen: 1. Histotóxicos: pueden ocasionar severa infección a nivel muscular denominada mionecrosis (conocida gangrena gaseosa). Clostridium perfringens: especie + importante responsable del 80-90%. También: C. novyi, C. septicum, C. histolyticum. Todos ellos producen una variedad de toxinas. C. perfringens es el único inmóvil de los clostridios patógenos. Crece rápido en agar sangre, pudiendo observarse colonias a las 24-48 h de incubación. C. perfringens: 5 tipos diferentes: A-E, diferenciados por toxinas alfa, beta… Tipo A: principal responsable de enfermedad humana, produce alfa toxina. Los tipos B, C, D y E existen en el tracto gastrointestinal de animales y sólo de forma ocasional en el hombre. La toxina α posee actividad letal, dermonecrótica y hemolítica. En general el mecanismo de acción es el siguiente: tras la vía de entrada que corresponde generalmente a una herida más ó menos profunda, se establecen condiciones adecuadas para que en la herida germinen las esporas de C. perfringens. Es muy frecuente que estas heridas se contaminen con otro tipo de bacterias, muchas veces aerobias con lo que se agota el oxígeno de la zona. Al mismo tiempo disminuye el pH, aumenta ác láctico y facilita la liberación de enzimas proteolíticas y otras sustancias altamente tóxicas. Toxina α que provoca una necrosis masiva. Toxina H: destruye colágeno y pared de los vasos sanguíneos. Toxina U: provoca una retención de líquidos en los tejidos originando el edema masivo que caracteriza a la gangrena gaseosa. Manifestaciones clínicas: contaminación heridas, mionecrosis, infecciones uterinas, septicemia, celulitis, fascitis y otras infecciones partes blandas. Identificación laboratorio: tinción gram: +, rectos, sin esporas ni leucocitos. Cultivo en agar sangre (37ºC, 24-48h). Patrón característico en agar sangre: hemólisis doble, compuesta por una estrecha zona de hemólisis completa producida por la toxina alfa y una zona más amplia de hemólisis incompleta producida por la toxina omega.