1. Pon tres ejemplos de determinaciones que se puedan realizar mediante
inmunocromatografía ¿Qué ventajas presenta esta técnica?
- Test de sangre oculta en heces, test de drogas, Estreptococo A, HCG orina…
– Se trata de una técnica rápida, fácil y cuenta con amplia gama de muestras.
2. ¿Qué diferencias hay entre las zonas S, T y C de una tarjeta inmunocromatográfica?
- S: Zona de la muestra.
- T: Zona donde se mira el test.
- C: Zona de control, siempre tiene que dar +.
3. Explica el fundamento de una tarjeta inmunocromatográfica para la detección de
antígeno.
4. ¿Qué diferencia fundamental hay entre un microscopio óptico convencional y uno
de fluorescencia?– La diferencia fundamental se encuentra en el sistema de iluminación, en el que el microscopio convencional se basa en el fenómeno de transmisión y el de fluorescencia en el fenómeno de emisión/refracción.
5. ¿Qué diferencia hay entre la inmunofluorescencia directa y la indirecta? ¿Cuál
resulta más cara? ¿Por qué?– Se diferencia en el número de Ac que utiliza, en la directa se utiliza 1 solo Ac y en la directa 2.- Resulta más cara la directa, porque requiere los Ac marcados para cada Ag que se quiera estudiar.
6. ¿Con qué técnica está más relacionada la amplificación con el complemento, con la inmunofluorescencia directa o con la indirecta? ¿Por qué?– Está más relacionada con la inmunofluorescencia indirecta, ya que en esta encontramos 2 Ac.
7. ¿Cómo se suelen conservar las muestras para evitar el deterioro de antígenos para
inmunofluorescencia? – Se cubre la muestra con glicerina para evitar la pérdida/deterioro de Ag.
8. ¿Para qué se utiliza la glicerina en la microscopía de fluorescencia?– Se utiliza para evitar la pérdida de fluorescencia y para que se concentren los rayos de luz.
9. ¿Para qué se utiliza la citometría de flujo? ¿Qué relación tiene con la
inmunofluorescencia?– Se utiliza para el estudio y separación de poblaciones celulares.
– Tienen relación ya que se pueden emplear Ac fluorescentes que se pegan a las células y están quedan marcadas para posteriormente sean detectadas por el detector de fluorescencia.
10. Cita aplicaciones clínicas de la inmunofluorescencia.Microbiología: Se utiliza para la detección de Ag y Ac bacterianos.Inmunología: Estudio/detección de autoanticuerpos.
11. ¿Se puede utilizar la técnica IFD en el inmunofenotipado de poblaciones celulares? Pon dos ejemplos.– Si se puede, con los Ac marcados con fluorocromos correspondientes (CD4 y CD8) a los Ag de la membrana de las células – Ej: CD4 y CD8.
12. ¿Por qué se dice que la IFD se parece a una tinción simple? Porque ambas técnicas son de 1 etapa (1 lavado), es decir, porque una utiliza 1 colorante y la otra 1 Ac.
14. Explica cómo se puede emplear la técnica IFI para la detección de anticuerpos antitiroideos. – Con tejido tiroideo en porta, suero del paciente y un segundo Ac.
15. ¿Cómo se denomina la técnica de inmunoelectrotransferencia que se utiliza para estudiar antígenos microbianos o anticuerpos en el suero de pacientes? Western Blot.
16. ¿Qué tres técnicas analíticas combina la inmunoelectrotransferencia?
– La electroforesis, la electrotransferencia y la identificación con Ac marcados.
17. ¿Qué técnica se emplea en la serología de confirmación de la infección por VIH?– Western Blot, el cual caracteriza distintos idiotipos del VIH.
18. Cita las seis etapas de la inmunoelectrotransferencia ¿En qué consiste la purificación del antígeno?
– Solubilización del Ag, preparación del gel, separación electroforética del Ag, electrotransferencia del Ag a una membrana, bloqueo de los sitios de unión de las proteínas en la membrana, utilización de Ac marcados para detectar bandas específicas.
– Preparar las proteínas para qué se de bien la separación en el gel.
19. ¿Qué tipo de electroforesis se emplea en la técnica anterior? ¿Qué soporte emplea? ¿Es restrictiva o no restrictiva?– Se emplea PAGE, electroforesis vertical en gel de poliacrilamida. – Se emplea un soporte en gel de poliacrilamida.- Es restrictiva (restringe por tamaño).
20. ¿En qué consiste el electroblotting? ¿Cómo se realiza?
– Consiste en realizar una inmunoelectrotransferencia (sándwich).
– Equilibrar el gel de poliacrilamida en tampón.
– Realizar el montaje: esponja, papel de filtro, gel, membrana, papel de filtro, esponja).
– Montar la cubeta y aplicar corriente eléctrica.
– Desmontar, lavar la membrana y secar.
(Las proteínas migran del polo – al polo +).
21. ¿Por qué hay que proceder al bloqueo de la membrana? ¿Cómo se consigue?
– Para bloquear los puntos de unión inespecífica de la membrana.
– Tratando la membrana con una solución proteica (albúmina-tween 20).
22. ¿Cuántos anticuerpos se emplean en la técnica de electrotransferencia? ¿Qué finalidad tienen los anticuerpos marcados?– Se emplean 2 Ac, el primero no marcado y un segundo marcado. – La finalidad de estos consiste en evidenciar la reacción Ag-Ac.
23. ¿Qué diferencia hay, en cuanto a la finalidad, entre las técnicas de
inmunotransferencia que emplean antígenos comerciales, y las que emplean un
primer anticuerpo y un segundo anticuerpo marcado comercial?
– Si utilizamos Ag comerciales (pegados) conocidos, lo que estaremos buscando será el Ac, en cambio, si el primer Ac es comercial, y un segundo Ac marcado, lo que estaremos buscando será el Ag.
1. ¿Qué se entiende por enfermedad autoinmune? ¿Cómo se puede comprobar que una enfermedad es autoinmune?-Una enfermedad en la que el sistema inmunitario desarrolla respuesta frente a componentes del propio organismo.
-Cuando existen autoanticuerpos o linfocitos T autorreactivos.
2. ¿Puede la inflamación mantenida originar un proceso autoinmune? ¿Por qué?
Sí, porque estimula continuamente el sistema inmunitario, es decir, produce contínuamente mediadores de inflamación y de autoantígenos que proceden del tejido lesionado.
3. ¿Por qué se dice que los procesos autoinmunes son, en general primarios y
multifactoriales? Cita cinco factores relacionados con el desarrollo de procesos autoinmunes. Porque aparecen aparentemente sin causa previa y sin factores que influyen en su aparición.
Factores: Edad, Sexo y factores hormonales, Genéticos, Patologías linfocitarias y factores infecciosos, Medicamentos y ambientales (químicos)
4. Señala si las siguientes afirmaciones son ciertas o falsas y corrige las afirmaciones que sean falsas:
a. Los autoanticuerpos se incrementan con la edad y por ello las enfermedades
autoinmunes se producen sobre todo en la vejez.(F) La mayoría aparece entre los 20- 50 años
b. Las enfermedades autoinmunes son más frecuentes en el hombre. (F) Son más frecuentes en la mujer.
c. Los estrógenos parecen incrementar la intensidad de los procesos autoinmunes.(V)
d. Las enfermedades autoinmunes están relacionadas con factores ambientales y no con factores genéticos. (F) Los factores genéticos están también relacionados con las enfermedades autoinmunes.
e. Existe una relación entre el déficit de complemento y el desarrollo del lupus
eritematoso sistémico. (V) con un brote LES
f. Las enfermedades autoinmunes son más frecuentes en determinados biotipos HLA. (V)
g. Los pacientes con LLC tienen tendencia a la anemia. (V) (anemia hemolítica)
5. Pon dos ejemplos de enfermedades autoinmunes que puedan estar relacionadas con procesos infecciosos previos. MIN 8 Fiebre reumática → S. pyogenes. Lupus eritematoso sistémico → Virus Epstein-Barr
6. Señala tres mecanismos mediante los cuales las infecciones puedan desencadenar un proceso autoinmune. Reacción cruzada de Ag extraño y propio inflamación mantenida. Formación de neoantigenos
7. ¿Pueden los fármacos o los disolventes orgánicos generar procesos autoinmunes? Pon un ejemplo de cada.Si. Insulina exógena que genera resistencia a la misma . Síndrome de Goodpasture
8. ¿Qué se entiende por tolerancia inmunológica? ¿Qué se entiende por deleción clonal, anergia clonal y supresión mediante citoquinas? Es la ausencia de respuesta frente a los autoantígenos. (la tolerancia es la no respuesta inmunológica) Son los tipos de tolerancia que se crean a tres niveles:
La deleción clonal:El no desarrollo de clones linfocitos que tenga Tcr contra los autoantigenos (No estan). Anergia clonal: falta de activación y proliferación de LT autoreactivos. (anergia es la no respuesta). Supresión mediante citoquinas producidas por activación de la células Treg (reguladores). (No deja que haya respuesta)
9. ¿Por qué tres mecanismos puede originarse la producción de autoanticuerpos por las células B?Reacción cruzada de Ag extraño y propio
Formación de neoantígenos en células por infección vírica o efecto de fármacos
Activación inespecífica (osea T independiente)
10. ¿Cuáles son los cinco mecanismos mediante los cuales los anticuerpos pueden originar lesiones de origen autoinmune?Unión a superficie celular y citolisis
Unión a superficie celular sin citólisis. Unión a elementos intracelulares. Unión a moléculas extracelulares. Lesiones mediadas por inmunocomplejos
11. ¿Qué diferencia hay entre la citotoxicidad mediada por complemento y por células inespecíficas? Pon un ejemplo de cada una de las anteriores.
Mediada por complemento | Células inespecíficas | |
En común | En los dos casos intervienen los anticuerpos de la superficie de las células | |
Diferencias | Activación de la cascada el complemento | Por la unión de las células a las Fc de los anticuerpos |
Ejemplos | tiroiditis de hashimoto | Lupus eritematoso |
12. Pon un ejemplo de enfermedad autoinmune en la que los anticuerpos bloqueen los receptores celulares y otra en la que actúen como estimulantes.
Bloqueo de receptores celulares: Miastenia gravis (bloqueo de receptores de acetilcolina) o diabetes tipo II. Estimulación por Ac unidos a receptores enfermedad de Graves.
13. Explica cómo se internalizan los anticuerpos anti-ADN que aparecen en los pacientes con LES. Porque el anticuerpo se une con el Fc a receptores celulares que permiten la incorporación del anticuerpo al interior de la célula.
14. Explica el mecanismo mediante el cual se produce el síndrome antifosfolipídico, ¿Qué característica principal tiene el síndrome anterior?
Se producen anticuerpos contra los fosfolípidos (se encuentran en el exterior celular)
Característica principal: tendencia a la formación de trombos (actúan los anticuerpos como procoagulantes)
15. ¿Qué se entiende por síndrome autoinmune originado por inmunocomplejos? Pon un ejemplo. Enfermedades autoinmunes hay tendencia a la formación de inmunocomplejos que pasan a la circulación sanguínea. Artritis reumatoide