PRACTICA 3 : INTERCAMBIO DE LÍQUIDOS ELECTROLITOS Y OTROS SOLUTOS A TRAVÉS DE MEMBRANAS
INTRODUCCIÓN
Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo, a través de los epitelios dérmicos, digestivos y respiratorios.
Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular. Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusión pasiva .Otras requieren consumir energía para moverse a través de las membranas contra sus gradientes de concentración .Estos fenómenos de difusión pasiva y transporte activo permiten la creación de una composición orgánica diferenciada.
La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente ,sino que permite el pasaje de muchas sustancias ,incluyendo el agua, el sodio , el cloro y la glucosa.La dirección del intercambio depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentración de los solutos
.Cuando cambia la composición del liquido extracelular los riñones excretan las sustancias presentes en excesos o reabsorben las necesarias para lograr preservar la homeostasis.
MÉTODO
Experimento Nº 1: Preparación del animal
Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente húmedo para que estén adecuadamente hidratados.
Antes de la pruebas se vacía la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina formada en condiciones experimentales. Sise coloca un sapo en una solución de dextrosa y luego se encuentra dextrosa en la orina, puede deducirse que fue absorbida a través de la piel hasta alcanzar una concentración suficiente en liquido extracelular que obligase a los riñones a excretar el exceso en la orina.Los sapos son colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones para producir cambios en la composición de los líquidos corporales.
Los animales son pesados antes de realizar la prueba y después de haber vaciado sus vejigas. Los cambios de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y después de la exposición a distintas condiciones experimentales.
Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza, sin llegar a cortar la piel , pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Después de esto se pesa al sapo y se registra su peso.
Experimento Nº2
Se inyecta a los sapos 4ml de una solución en el saco linfático dorsal. Esta solución puede ser hipotónica, hipertónicas o isotónicas; de cloruro de sodio o dextrosa , también inyectaremos en algunos casos agua destilada .Se vuelve a pesar para confirmar que todo el liquido inyectado se encuentre en el animal.
Se colocan 150 ml de liquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de el.El liquido debe cubrir la mitad inferior del animal pero el punto de inyección debe permanecer por encima del nivel .
Experimento Nº 3
Después de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vacía comprimiendo el abdomen y se recolecta la orina.
Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso después de recolectar la orina del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento. Se debe tomar en cuenta el peso después de inyectar los 4ml.de solución en los sacos dorsales .Se calcula el porcentaje de variación de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina formada durante el experimento.
Experimento Nº 4: Análisis de glucosa en orina del sapo
La glucosa se determinara en la orina del sapo mediante el método de la glucocinta (Urine Strip Winer Lab).
PRACTICA 4 : ESTIMULACIÓN MUSCULAR
INTRODUCCIÓN
Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a estímulos, es decir variaciones del medio químicas o físicas, tales como alteraciones de la temperatura, deformación mecánica, etc.
En los fenómenos estímulo respuesta, la respuesta depende de las características del estimulo y de las condiciones del tejido estudiado. La descripción correcta de la relación entre estimulo y respuesta requiere el control de la duración , intensidad y frecuencia del estimulo.
Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en función al tiempo y al espacio.
MÉTODO
Experimento N°1
Se anestesia al sapo por destrucción del cerebro y la médula espinal.
Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la región anterior homóloga al tronco. Se continúa la incisión de la piel en cinturón. Una vez completado el cinturón, se desprende la piel de un tirón hacia abajo. En la región dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.
Se levanta el urostilo con la pinza de disección y se seccionan los elementos paravertebralmente y en dirección cefálica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso transverso de la novena vértebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen por tres raíces más arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios ciáticos. Por debajo se observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones.
Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios ciáticos.
Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios ciáticos y se realiza una ligadura lo mas proximal posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reacción muscular.
Se secciona el nervio proximalmente a la médula, entre la columna vertebral y la ligadura.