Protocolo de Urocultivo: Guía Completa para el Diagnóstico de Infecciones Urinarias

Protocolo de Urocultivo

Este protocolo describe los procedimientos para el análisis de urocultivos, desde la resiembra hasta la interpretación de resultados, incluyendo la identificación de bacterias comunes y la detección de sustancias antibacterianas.

Resiembra

Las muestras con un sedimento patológico (más de 5 leucocitos por campo de 400x) y con un recuento de colonias menor de 10,000 UFC/mL serán resembradas en agar chocolate e incubadas en CO₂ por 24 horas. Las placas originales deben ser conservadas en incubación por 24 horas adicionales.

Identificación

Se necesita contar con los siguientes medios y reactivos para la identificación de las bacterias más comunes productoras de ITU, aparte de la coloración de Gram:

Enterobacterias:

• Agar TSI
• Agar LIA
• Agar citrato de Simmons
• Medio de movilidad (SIM)
• Prueba de indol

Bacilos Gram negativos no fermentadores:

• Medio OF con glucosa
• Agar nitrato
• Agar TSI
• Agar LIA
• Agar citrato de Simmons
• Medio de movilidad
• Prueba de indol
• Prueba de oxidasa
• Agar Mac Conkey

Staphylococcus:

• Medio manitol salado
• Prueba de coagulasa
• Disco de colistina
• Agua oxigenada para la prueba de catalasa

Enterococcus:

• Agar bilis esculina
• Agar telurito de potasio
• Prueba de catalasa
• Agar nutritivo con cloruro de sodio 6,5%

Cálculos e Interpretación

• Se realizará un recuento de colonias, cada colonia se contabilizará como equivalente a 1,000 o 2,000 UFC/mL de acuerdo al asa calibrada utilizada.
• Recuentos menores de 10,000 UFC/mL se consideran como contaminación y los cultivos son reportados como negativos.
• Recuentos entre 10,000 y 100,000 UFC/mL son considerados como sospechosos, se realizará la identificación y el antibiograma.
• Recuentos mayores de 100,000 UFC/mL son considerados como positivos y se realizará la identificación y el antibiograma.
• Para recuentos mayores de 100,000 UFC/mL, no es necesario determinar el número exacto, pues su determinación no variará el manejo clínico, es decir que tener un recuento de 100,000 o un millón solo indican la presencia de infección urinaria y el manejo para ambos es similar, variando solo de acuerdo al cuadro clínico del paciente. Por lo que algunos laboratorios en estos casos solo indican > de 100,000 o > de 250,000 UFC/mL. Los recuentos menores sí deben ser cuantificados.
• En muestras de mujeres, en las que se observe gran cantidad de células epiteliales, un recuento menor a 100,000 UFC/mL, menos de 5 leucocitos x campo en el sedimento y/o presencia de 3 tipos diferentes de colonias en el cultivo incluyendo la presencia de bacilos Gram positivos largos, se considerará como contaminación por flora vaginal, y se reportará como cultivo negativo y presencia de flora vaginal.
• En el cuadro de Echevarria, publicado en Acta Médica Peruana se detalla la interpretación del urocultivo en relación al cuadro clínico, la etiología y el recuento de colonias. Se debe tener en cuenta que en algunos casos, recuentos “pequeños” están asociados a infección urinaria.
• La presencia de más de tres colonias diferentes está asociado a contaminación, excepto en pacientes con presencia de sonda vesical, en los cuales es frecuente encontrar asociaciones de bacterias y hongos.

Resultados falsos positivos:

• Orinas contaminadas con deposiciones o secreciones vaginales.
• Recolectores colocados durante más de 30-40 minutos.
• Demora en el envío de la muestra de orina al laboratorio, falta de refrigeración o uso de desinfectantes contaminados.
• Contaminación en el laboratorio.

Resultados falsos negativos:

• Tratamiento antibiótico reciente (la muestra debe tomarse por lo menos 5 días después de suspendido el antibiótico no profiláctico).
• Gérmenes de difícil desarrollo (formas L).
• Orina muy diluida o de baja densidad.
• El uso de desinfectantes locales.
• Obstrucción completa del lado infectado.

Observaciones

• Los medios de cultivo deben estar a temperatura ambiente y la superficie debe estar seca.
• Los recuentos no se aplican a muestras de orina obtenidas por punción vesical, en estos casos cualquier recuento es considerado como significativo.
• Con relación a urocultivos condicionales: la ausencia de leucocitos no se considerará como indicación para no realizar un urocultivo.

Presencia de Sustancias Antibacterianas

El propósito es determinar la presencia de sustancias antibacterianas residuales en orina. Este procedimiento se aplica en todos los casos en los que se solicite urocultivo.

Equipos y Materiales

• Discos de papel filtro Whatman N° 3 estériles de 6 mm de diámetro.
• Placa de Agar Mueller Hinton 100 x 15 mm.
• Tubo con caldo Mueller Hinton x 2 mL.
• Alicate sacabocados para 6 mm de diámetro.
• Cepa de Bacillus subtilis ATCC 6633.

Procedimiento

1. Hacer una suspensión de Bacillus subtilis en un tubo de caldo tripticasa soya o caldo Mueller Hinton que sea similar al tubo 0,5 de la escala de McFarland.
2. Sembrar la placa de agar Mueller Hinton con la suspensión de bacterias de manera similar a un antibiograma.
3. Tomar con las pinzas un disco de papel filtro y sumergirlo en la orina.
4. Colocarlo en la placa sembrada según la plantilla.
5. La placa será incubada a 35°C por 18 horas.
6. Se observará la presencia de un halo de inhibición alrededor del disco con la orina.

Interpretación

• Cualquier diámetro de halo se considerará como prueba positiva.
• La ausencia de halo se considera como prueba negativa.
• El resultado se informa como “Sustancias antibacterianas residuales: Positivo o Negativo”.