Respuesta Inmune a Infecciones Virales
Además del IFN tipo 1, el IFN-γ, el TNF y la IL-2, aumentan el potencial lítico de estas células.
Inmunidad Adaptativa ante Virus
- La inmunidad específica contra virus está mediada tanto por mecanismos celulares como humorales.
- En las etapas iniciales de la infección, los anticuerpos específicos antivirales son muy importantes. Los dirigidos contra las proteínas de envoltura o de las cápsides virales que participan en la adsorción, impiden la unión con el receptor celular y, por lo tanto, el ingreso a la célula susceptible; estos son llamados anticuerpos neutralizantes.
- Además, opsonizan a los virus, mejorando las funciones fagocíticas, aunque también pueden facilitar la infección de aquellas células portadoras de receptores Fc. La IgA de las mucosas es importante en la neutralización de virus que ingresan al organismo por vía respiratoria o digestiva; de hecho, la inducción de inmunidad secretoria es una de las bases para el desarrollo de vacunas orales o nasales.
- La activación del complemento también puede participar de la inmunidad mediada por anticuerpos, principalmente lisando virus envueltos y promoviendo la fagocitosis.
- La inmunidad humoral es un componente importante de la respuesta inmune contra los virus, pero no es suficiente para erradicar muchas infecciones virales. Los anticuerpos tienen efecto protector solo en las primeras etapas de la infección viral.
- Además, es importante destacar que su capacidad neutralizante in vitro tiene poca correlación con la capacidad protectora in vivo y que es difícil transferir inmunidad antiviral a animales no inmunes solo con anticuerpos purificados.
Mecanismos de Acción de los Linfocitos T Citotóxicos
Los linfocitos T citotóxicos diferenciados ejercen su efecto antiviral por tres mecanismos:
- Lisis de las células infectadas por liberación de gránulos que contienen, entre otras macromoléculas, una proteína formadora de poros (perforina o citolisina).
- Estimulación de enzimas intracelulares que degradan los genomas virales.
- Secreción de citoquinas, más específicamente IFN-γ y linfotoxina (LT). Aunque estas células producen citoquinas, no lo hacen en cantidades suficientes o en los tipos necesarios para generar la diferenciación completa de sus precursores en linfocitos T citolíticos activos y diferenciados; de ahí la necesidad de las citoquinas producidas por las células T helper CD4+ mencionadas anteriormente.
Evasión de los Mecanismos Inmunes por los Virus
- Variación antigénica
- Supresión de la respuesta inmune
Variación Antigénica
En muchos virus se ha identificado un gran número de tipos serológicamente diferentes. La capacidad viral de variar antigénicamente es uno de los mecanismos de evasión más difundido e ilustrado por muchos virus. En el VIH, por ejemplo, se observa una importante variabilidad genética, fundamentalmente en los genes, debida a los errores cometidos por la enzima transcriptasa reversa viral, que pueden conducir a cambios de hasta un 30% en regiones hipervariables de la Gp120.
Supresión de la Respuesta Inmune
Este mecanismo queda ejemplificado por aquellos virus capaces de infectar células del sistema inmune, linfocitos o macrófagos, alterando su función e inhibiendo la inmunidad adaptativa. Este fenómeno de supresión inmune se observa en infecciones causadas por VIH, virus Epstein Barr, citomegalovirus y virus del sarampión, entre otros.
Práctica Nº 1: Aislamiento e Identificación de Cocos Gram Negativos: Género Neisseria
Introducción
Las Neisserias son cocos Gram negativos que se presentan característicamente en pares, con los lados adyacentes aplanados, simulando “granos de café”. Comprende varias especies, entre estas N. gonorrhoeae y N. meningitidis, que causan frecuentemente enfermedades significativas en el hombre. En muestras clínicas del tracto urogenital u otras, se tiñen adicionalmente con el colorante azul de metileno, observándose las Neisseria intra y extracelularmente.
Estos microorganismos son exigentes y requieren medios enriquecidos como el agar chocolate, que le proporciona una rica fuente de hierro, y el agar Thayer Martin.
La mayoría de las especies requieren para el crecimiento una humedad relativamente alta y una tensión de CO2 entre 5 a 10%. Desarrollan a temperaturas exactas entre 35 a 37°C y un pH de 7.2 a 7.6.
Todas las especies producen catalasa y citocromo-oxidasa, que permiten diferenciarlos de otros microorganismos morfológicamente similares.
La diferenciación bioquímica se realiza por pruebas de utilización de hidratos de carbono: glucosa, maltosa, sacarosa y lactosa.
Diagnóstico de Gonorrea
El diagnóstico de gonorrea requiere una estrecha cooperación entre el médico y el laboratorio. Se deben considerar los siguientes aspectos:
- Recolección correcta de la muestra.
- Selección del recipiente apropiado para el transporte y rápido envío al laboratorio.
- Selección del medio de cultivo apropiado.
- Aislamiento e identificación de la bacteria en el laboratorio.
Metodología
- Observar en el medio de Thayer Martin y agar chocolate las colonias pequeñas, circulares, de bordes continuos, blanco-grisáceos, convexas, brillantes o ligeramente opacas si corresponden a N. gonorrhoeae, y si es N. meningitidis, colonias pequeñas de borde entero, circulares, translúcidas o ligeramente opacas.
- Dejar caer una gota del reactivo de oxidasa sobre una colonia y observar entre los 2-3 minutos el cambio de color del rosado al marrón o negro, que corresponde a una prueba de oxidasa positiva.
- Realizar un frotis de la colonia oxidasa positiva y colorearla por el método de Gram. Comparar con la lámina control.
- Realizar un frotis de la muestra clínica de secreción endocervical y colorearla con azul de metileno.
Práctica Nº 2: Aislamiento e Identificación de Bacilos Gram Positivos: Género Bacillus
Introducción
El género Bacillus agrupa microorganismos aerobios Gram positivos, formadores de esporas y que pueden sobrevivir en el ambiente por muchos años. Algunas especies causan enfermedades en el hombre y los animales, como el B. anthracis, causante de la enfermedad conocida como «carbunco»; otros, como el B. cereus, B. subtilis, B. megaterium y B. mycoides, son saprofitos y se encuentran en el suelo, el agua y el aire.
La especie patógena B. anthracis, causante del carbunco, en los procesos patológicos se presenta como un bacilo rectilíneo, Gram positivo, grueso, inmóvil y capsulado. En los cultivos, las colonias son grandes, mates, rugosas, con bordes festoneados (aspecto de cabeza de medusa), se agrupan en largas cadenas, sin cápsula y, conforme el cultivo envejece, forman esporas.
Procedimiento
- Sembrar la muestra en placas de agar sangre, agar nutritivo, caldo nutritivo y gelatina.
- Preparar frotices para colorear con Gram, Hiss y Wirtz Conklin.
Coloración de Hiss (para Cápsula)
- Preparar un frotis.
- Cubrir con fucsina básica y calentar hasta el desprendimiento de vapores por 30 segundos.
- Lavar con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%.
- Lavar con agua corriente y secar.
- Observar al microscopio con lente de inmersión.
Coloración de Wirtz Conklin (para Esporas)
- Preparar un frotis.
- Cubrir con verde de malaquita y calentar hasta el desprendimiento de vapores por 5 minutos (adicionar colorante cada vez que falte).
- Lavar con agua corriente.
- Colorear con safranina al 0.5% por 1 minuto.
- Lavar y secar.
- Observar al microscopio con lente de inmersión.
Lectura
En los Cultivos
- En agar sangre: las colonias se observan blanco-grisáceo, no hemolíticas en las especies patógenas y β-hemolíticas en las especies saprofitas.
- En agar nutritivo: se observan bacilos endoesporulados.
- En caldo nutritivo: se observa un sedimento en el fondo del tubo.
- En agar semisólido: se observa un crecimiento en forma de pino invertido.
- En gelatina: solo las especies saprofitas producen hidrólisis.
En las Láminas Coloreadas
- Gram: bacilos Gram positivos dispuestos en cadenas; las esporas generalmente se ubican en el centro del bacilo.
- Hiss: el cuerpo bacteriano se observa de color púrpura y la cápsula de color claro o incoloro.
- Wirtz Conklin: el cuerpo bacteriano se observa de color rosado y la espora de color verde.